Valmisteluvaihe: Tässä alkuvaiheessa 6-hiilinen sokerimolekyyli (yleensä glukoosi) fosforyloidaan kahdesti, jolloin muodostuu fruktoosi-1,6-bisfosfaattia. Tämä prosessi vaatii 2 ATP-molekyylin syöttämisen ja hyödyntää entsyymejä heksokinaasia ja fosfofruktokinaasia.
Katkaisuvaihe: Tässä vaiheessa fruktoosi-1,6-bisfosfaatti pilkkoutuu kahdeksi 3-hiilisokeriksi:glyseraldehydi-3-fosfaatiksi (GAP) ja dihydroksiasetonifosfaatiksi (DHAP). Nämä kaksi molekyyliä ovat keskenään muuntuvia, ja ne molemmat voivat edetä polulla pidemmälle.
Maksuvaihe: Tämä viimeinen vaihe sisältää GAP:n ja DHAP:n muuntamisen pyruvaaiksi, jolloin prosessissa syntyy ATP:tä ja NADH:ta. Tämä vaihe koostuu useista entsymaattisista vaiheista, mukaan lukien substraattitason fosforylaatio- ja hapetusreaktiot. Viime kädessä syntyy 2 pyruvaattimolekyyliä sekä yhteensä 4 ATP- ja 2 NADH-molekyyliä jokaista glykolyysiin tulevaa glukoosimolekyyliä kohti.