* Nikodeemus: Rottien viisas, vanha johtaja.
* Jonathan: Nikodemuksen poika, nuori ja kunnianhimoinen rotta, joka kyseenalaistaa usein isänsä johtajuuden.
* rouva. Brisby: Tarinan päähenkilö, leskeinen kenttähiiri, joka etsii rotilla apua talonsa siirtämisessä.
* Jeremy: Rouva Brisbyn poika, joka on vakavasti sairas.
* Justin: Rouva Brisbyn toinen poika.
* Timothy: Nikodemuksen pojanpoika, joka on melko ujo ja joutuu usein vaikeuksiin.
Huomaa: Vaikka "rouva Frisby ja NIMH:n rotat" on klassinen lastenkirja, ei ole mainintaa siitä, että rotissa on nimeltään "NIMH" kirjassa. "Nimh" viittaa kansalliseen mielenterveysinstituuttiin, josta tarinan rotat oli kokeiltu.